Vrednotenje kolon za analizo in kontrolo kakovosti oligonukleotidov
KNAUER, visokotehnološki proizvajalec laboratorijske opreme za tekočinsko kromatografijo, je objavil študijo, ki se osredotoča na vprašanje, kakšne lastnosti mora imeti kromatografska kolona, da je primerna za analizo oligonukleotidov.
Zakaj je vprašanje analize oligonukleotidov in pravilna izbira kolone sploh pomembno?
Oligonukleotidi so kratke verige nukleinskih kislin (DNA ali RNA). Kljub svoji majhnosti imajo zelo pomembno vlogo v biologiji, medicini in biotehnologiji, saj delujejo kot nosilci genetske informacije in kot ključ za prepoznavanje določenih zaporedij DNA ali RNA. Prepoznani so kot temeljno orodje sodobne molekularne biologije – orodje, ki je ključno za diagnostiko, raziskave in razvoj novih terapij. Bistvo njihove uporabnosti je v visoki specifičnosti delovanja, saj se lahko vežejo točno na določeno zaporedje DNA ali RNA.
V sodobni medicini so oligonukleotidi nepogrešljivi pri razvoju naprednih terapevtikov, kot so genske terapije, »antisense« zdravila in mRNA tehnologije. Pomembni so za razvoj novih zdravil za zdravljenje genetskih bolezni, raka in virusnih okužb. Brez oligonukleotidov tudi sodobna molekularna diagnostika praktično ne obstaja.
Zanimanje za oligonukleotide na različnih področjih raziskav, zlasti v medicini, se je po izbruhu pandemije koronavirusa močno povečalo. Osnova za njihovo uporabo pa je zanesljiva analitična metoda z visoko ločljivostjo.
Ena najpogosteje uporabljenih tehnik za analizo oligonukleotidov je kromatografija z ionskim parom v reverzni fazi (IP-RP). Pri tej metodi ionski reagent v stacionarni fazi omogoča zadrževanje nabitih molekul na RP-koloni, detekcija pa običajno poteka z UV detektorjem pri 260 nm.
Pri omenjeni tehniki so parametri, ki so ključni za uspešno analizo oligonukleotidov, predvsem obstojnost kromatografske kolone pri višjih temperaturah in pH vrednostih, dobra ločljivost, ustrezna simetrija vrhov in visoka ponovljivost rezultatov.
Kaj nam razkriva KNAUER-jeva študija?
KNAUER se v svoji študiji osredotoča prav na izbor ustreznih kolon za analizo in kontrolo kakovosti oligonukleotidov z uporabo metode IP-RP. Izvedli so primerjalno testiranje različnih kolon z uporabo enake IP-RP metode na različnih vzorcih (npr. 43mer DNA). Analizirali so surove, vmesne prečiščene vzorce in končne oligonukleotidne produkte, pri katerih so preverili njihovo čistost.
Rezultati študije so pokazali zelo podobno obnašanje kolon glede ločljivosti ter simetrije in površine vrhov, pri čemer je KNAUER-jeva kolona Sepapure oliGO pokazala rahlo boljšo ločljivost. Izmerjena čistost vzorcev je bila primerljiva z referenčnimi podatki.
Zaključki KNAUER-jeve študije so:
- različne kolone lahko dosegajo primerljivo analitično zmogljivost
- KNAUER kolona Sepapure oliGO predstavlja ustrezno alternativo uveljavljenim rešitvam
- metoda IP-RP je primerna za rutinsko analizo in kontrolo kakovosti oligonukleotidov
Vabimo vas k ogledu študije, kjer se boste lahko prepričali, da je za zanesljivo analizo oligonukleotidov ključna pravilna izbira kolone, stabilnost pri zahtevnih pogojih in dobra ločitev zelo podobnih nečistoč.
Celotna študija 15 min branja
Kontakt: sales@bia.si