Avtomatizirano dvostopenjsko čiščenje proteinov s kationsko izmenjevalno kromatografijo in razsoljevanjem
V mnogih primerih je za doseganje zadostne čistosti proteinov potrebnih več zaporednih korakov čiščenja. Prehod iz enega koraka v drugega pa je lahko zelo zamuden in pogosto zahteva ročno posredovanje. Te omejitve kažejo na potrebo po FPLC sistemih, ki omogočajo avtomatizirano dvostopenjsko čiščenje.
Glede na želeni izkoristek in čistost ciljne beljakovine se v praksi kombinirajo različne kromatografske metode. V KNAUER-jevi študiji dvostopenjskega čiščenja nam je poglobljeno predstavljena možnost kombiniranja dveh zaporednih, a neodvisnih metod, in sicer kationsko-izmenjevalne kromatografije, ki ji sledi razsoljevanje. Vsaka metoda se odvija na svoji specifični koloni, kar omogoča čiščenje ciljne molekule brez ročnega poseganja.
Osnovno načelo dvostopenjskega čiščenja je, da se vzorec proteina najprej nanese na prvo kolono, kjer se v prvem koraku proteini ločijo glede na naboj, pri čemer se ciljni protein zazna in samodejno zbere v zanki. V naslednjem koraku se ciljni protein avtomatsko prenese na drugo kolono, kjer se izvede razsoljevanje in se tako dodatno izboljša njegova kakovost oziroma čistost.
KNAUER-jeva študija je bila izvedena s pomočjo standardnega večmetodnega FPLC sistema KNAUER Lab, prilagojenega za avtomatsko dvostopenjsko čiščenje. Dva modelna proteina, citokrom C in ribonukleaza A, sta bila ločena z ionsko-izmenjevalno kromatografijo (kationsko izmenjavo). Citokrom C je bil samodejno shranjen v vzorčni zanki in nato prenesen na drugo kolono, kjer je potekala menjava pufra z uporabo razsoljevalne kolone.
In rezultat? Modelni protein citokrom C je bil uspešno očiščen iz ribonukleaze A, ročno posredovanje ni bilo potrebno.
Hitra in avtomatizirana povezava dveh kromatografskih metod v en sam avtomatiziran proces odpravi potrebo po ročnem ravnanju z vzorcem. To pa skrajša čas analize, zmanjša možnost napak in izboljša ponovljivost. Takšen pristop je mogoče enostavno prilagoditi različnim postopkom čiščenja, s čimer povečamo učinkovitost in optimiziramo delovni proces.
Vabimo vas k ogledu študije, kjer boste pridobili več informacij in tehničnih podatkov o njeni izvedbi.
Celotna študija 15 min branja